细胞建筑师
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外泌体(Exosomes)是细胞外囊泡(Extracellular vesicles, EVs)的一种,大小在30-150nm的盘状囊泡,由细胞内的多泡小体(Multivesicular bodies, MVB)与细胞膜融合后以外泌体的形式释放到细胞外,广泛存在于细胞培养上清以及各种体液中。

图片来源:网络

传统工艺收获方式

  • 差速超速离心法
    操作复杂,耗时久,产量低,难以处理大批量样本
  • 密度梯度离心法
    虽可实现外泌体的分离,但存在与差速超速离心法相似的问题
  • 聚合物沉淀法
    纯度较低,且聚合物材料的混杂可能会影响下游分析
  • 尺寸排阻色谱法
    不能分离与外泌体尺寸相近的颗粒,且经尺寸排阻色谱后的外泌体会被严重稀释,需要将其浓缩才能用于后续实验
  • 切向流超滤法
    纯度略低
  • 微流控法
    只适合少量样本的提取

华龛3D FloTrix®工艺收获方式

  • 3D 仿生培养
    模拟细胞体内生活环境,促进细胞分泌高质量外泌体
  • 培养周期短
    单批次培养周期仅为 4 ~ 5 天
  • 产物质量可靠
    既可收获上清收集外泌体,又可收获高质量细胞,符合细胞、外泌体质检要求
  • 蛋白含量高
    单批次外泌体蛋白含量达到克级
  • 高纯度高浓度
    单批次收获 1013~14个外泌体
  • 支持定制培养
    支持 3D FloTrix® 定制化工艺收获外泌体

华龛3D FloTrix®工艺收获外泌体

采用3D FloTrix®动态大规模扩增培养工艺培养间充质干细胞,外泌体粒径分布于30-150nm之间;外泌体高表达TSG101、CD81和CD63;电镜结果显示外泌体结构完整,为经典外泌体结构。

采用3D FloTrix® 工艺大规模培养间充质干细胞,通过vivaEXO收获的外泌体符合外泌体标准

  • 核心技术自主研发

核心产品3D TableTrix®微载片及3D FloTrix®生物反应器均为自主研发并获得国家专利认证

  • 专供细胞药物大规模扩增培养

3D FloTrix®工艺专为定制化、规模化、智能化、标准化生产制备设计,并提供了一套完善的解决方案。

  • 显著提升产物(品)制备效率

较传统人工外泌体收获方式可节省约90%空间、90%人力、60%试剂耗材及50%时间成本。

3D FloTrix® vivaSPIN自动化生物反应器

  • 整套系统全封闭设计,常规生物实验室即可满足运行条件
  • 罐体规格5L、10L、15L。可高温高压灭菌
  • 定制化3D规模化扩增工艺,节省客户工艺摸索时间
  • 高精度控制温度、溶氧、pH、转速
  • Air、O2、CO2、N2等细胞培养工艺参数的自动化控制
  • 单批次可生产十亿到百亿干细胞
  • 控制器触摸屏人机交互界面,倾角设计,操作方便
  • 可选配细胞自动回收装置,收获细胞更加便捷
  • 可选配外泌体收获装置,单批次可生产1013-14个外泌体
  • 罐体封闭性高,拥有多项独特设计,在C+A级环境下实现可靠的封闭式细胞培养
  • PECALS® 控制系统,可精准执行自动化程序、支持远程参数控制、全信息实时记录,让您在家也能监控细胞培养过程
  • 3D FloTrix® CELL PRO活细胞在线监测系统,可实时精准监测活细胞状态,自动生成细胞曲线,让细胞培养更轻松

3D FloTrix® vivaEXO 外泌体收获系统

  • 高效处理——单次处理10L原液,用时仅需1-3小时
  • 收获体积小——高倍浓缩,10L原液终产品体积低于500mL
  • 使用便捷——采用一次性全封闭耗材,人机交互界面友好,操作简单易用
  • 自动化处理——多级程序关联,可定时定量,减少人工值守
  • 全过程参数监控——精密控制液体压力,兼顾外泌体质量及样品处理速度,处理量精确监控,监测处理进程,自动启动多级程序及定量收获,参数异常进行报警提示及记录
  • 符合GMP规范——内置审计追踪功能,用户登录及多级权限管理,数据完整可追溯,数据、操作、警报信息均实时记录,不可删改,记录均可导出
  • 华龛生物两款核心微载体产品通过CDE审评审批备案(登记号:F20210000003、F20200000496)
  • "细胞用明胶微载片*"完成FDA DMF药用++辅料资质备案(DMF: 35481,已激活),是美国FDA官网公示的DMF列表中唯一一款微载体产品。
  • 微载体GMP生产平台顺利通过了ISO9001、ISO13485质量管理体系认证。

应用案例

我们使用vivaEXO分离获得外泌体,并与超速离心法对比(客户案例)。

通过vivaEXO设备,1L细胞上清可获取外泌体颗粒数6.67×1012,平均粒径为102.5 nm;与之对比,通过超速离心法, 1L细胞上清可获取外泌体颗粒数8.9×1010,平均粒径为159.5nm。可见,采用vivaEXO获取的外泌体浓度较高,而且粒径更小。

▲ vivaEXO(左)与超速离心法(右)分离的外泌体粒径及浓度示意图比较

另外,两种方法均可见外泌体的经典结构。

▲ vivaEXO(左)与超速离心法(右)分离的外泌体结构比较

外泌体western blot检测

▲vivaEXO分离的外泌体CD63与TSG101蛋白表达

使用vivaEXO外泌体分离装置获得的外泌体结构清楚,粒径较小,浓度较高。另外,本装置中所使用的分离柱均可以定制,用于其它物质的分离。

技术服务

面对细胞培养和收集时的不同导向&节点,华龛也能提供相应技术服务。

服务项目:

 

  • 细胞上清生产服务:大批量生产干细胞、工程化细胞培养上清;
  • 外泌体纯化服务:细胞上清中的外泌体纯化;
  • 质量检测服务:细胞上清中微生物、内毒素、支原体、蛋白浓度、细胞分泌因子等检测。外泌体粒子浓度、粒径大小、透射电镜及免疫印迹等外泌体鉴定。

服务内容:

 

  • 提供定制化实验方案;
  • 定制化三维细胞培养及细胞衍生物收集;
  • 三维细胞培养工艺优化。

 

华龛生物技术研发团队致力于提供基于3D微载体的细胞规模化定制化扩增工艺整体方案,解决您在基因与细胞治疗、细胞外囊泡、疫苗及蛋白产品等生产的上游工艺开发中遇到的难题。


若需更多详细资料,请填写问卷留下您的联系方式,我们将安排技术人员联系您!

外泌体大规模培养制备整体解决方案 信息申请表

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外泌体大规模制备
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