近年来，干细胞研究及应用已成为衡量一个国家生命科学与医学发展的重要指标，干细胞及转化研究也是我国“十四五”国家战略重点专项之一。随着相关研究的不断深入，全产业各个环节都衍生出更多市场发展空间，但国产技术创新突破依然是我国干细胞行业发展的短板。

华龛生物原创3D细胞智造平台，利用3D微载体及生物反应器等核心技术转化成果，成功构建了“细胞大规模定制化扩增工艺”。

新品3D FloTrix® vivaPREP PLUS细胞收获系统的加入，更进一步助力这项工艺实现新突破，达成单批次【百亿量级】的干细胞生产制备。

该细胞收获系统具备以下特征：

✔ 全封闭自动化操作

✔ 连续流清洗技术

✔ 一次性无菌耗材

✔ 符合GMP追溯

【案例分享】

3D FloTrix® vivaPREP PLUS细胞收获系统助力干细胞大规模培养工艺（细胞传代、制剂收获）。

三维育种

准备UC-MSC细胞2×10⁸个，以及适量3D TableTrix® 微载体W01 和3D FloTrix® 三维干细胞无血清培养基（简称无血清培养基），接种于5L 3D FloTrix® vivaSPIN生物反应器中。启动间歇接种模式6h，改为恒速细胞培养模式。

细胞传代

✦ 细胞培养完成后，排出5L 3D FloTrix® vivaSPIN生物反应器中培养上清，加入3D FloTrix® Digest裂解液，原位裂解微载体，收获细胞悬液。

✦ 采用3D FloTrix® vivaPREP PLUS细胞收获系统进行细胞的浓缩和洗涤：

①提前准备耗材包1套（包括主耗材+储液袋若干）。细胞悬液1L、生理盐水1L、无血清培养基0.5L，灌入耗材包储液袋中。

② 采用无菌接管机，焊接至主耗材上，全封闭式完成细胞悬液的浓缩，清洗和重悬工作。

③启动设备，进入耗材包自检和安装环节，完成耗材包安装工作。

④ 将细胞样品袋、洗液袋和重悬液袋连接至设备主耗材上。根据实验需求，进行参数设置。

⑤ 运行完成后，取样计数，根据需求重悬和分装细胞悬液。采用无菌接管机，取走种子细胞。

放大培养

通过3D FloTrix® vivaPREP PLUS细胞收获系统制备的UC-MSC细胞2×10⁹个，分别接种至2台装有3D TableTrix® 微载体悬液的15L 3D FloTrix® vivaSPIN 生物反应器中，补加无血清培养基。开启细胞模式，培养4-5天，提前设置换液和培养参数。

细胞制剂收获

采用3D FloTrix® vivaPREP PLUS细胞收获系统和人工手动两种方式进行1×10¹⁰细胞的浓缩、清洗和收获。将两种方式（物料准备如下表）收获的细胞进行细胞质量检测。

检测结果

1. 使用3D FloTrix® vivaPREP PLUS自动化收获系统和手动收获两种方式收获1×10¹⁰UC-MSC细胞，设备自动化收获细胞回收率高达95%，手动方式回收率86%；收获细胞活率均达到95%以上。

                   图1：不同方式收获细胞回收率和活率对比

2. 3D FloTrix® vivaPREP PLUS自动化收获的UC-MSC，进行细胞表型分析，符合行业质检标准。

3. 3D FloTrix® vivaPREP PLUS自动化收获的UC-MSC细胞，进行裂解液和微载体残留分析，符合中检院质检标准。

                       图2：裂解液和微载体残留对比分析

4. 3D FloTrix® vivaPREP Plus自动化收获的UC-MSC细胞，进行二维和三维培养后，细胞增殖能力良好。

5.3D FloTrix® vivaPREP PLUS自动化收获的UC-MSC细胞，具有较好的成软骨、成骨、成脂三向分化潜能。

6. 3D FloTrix® vivaPREP PLUS自动化收获UC-MSC进行成瘤性检测，未发现克隆形成，细胞不具备致瘤性。

7. 端粒酶活性：

检测内参 GAPDH 的 Ct 值在 17±3 之间，端粒酶催化亚基 TERT 基因的 Ct 值≥35且无明显扩增曲线，该样本未检测到端粒酶活性，结果为阴性。

核型分析：

3D FloTrix® vivaPREP Plus自动化收获的MSC细胞，染色体核型正常。

【结论】

采用3D FloTrix® vivaPREP PLUS细胞收获系统，收获UC-MSC细胞1×10¹⁰个：

✦ 成本、空间、人力：节省30%的成本，节省80%的空间，节省90%的人力。

✦ 回收率和活率：细胞回收率和活率均高达95%，均一性好，避免人为操作不当，导致的损失。

✦ 细胞表型\残留分析\增殖能力\三向分化\成瘤性\端粒酶活性\核型分析：收获的UC-MSC，细胞质量检测均符合行业质检标准。

干细胞大规模生产制备作为研究成果完成转换应用，实现产业化发展的基石，相关的工艺、产能、质量、成本更是重要的考量标准。

华龛生物基于核心技术产品3D TableTrix® 微载体、3D FloTrix® 系列自动化生物反应器及细胞收获系统，结合3D FloTrix® 动态培养工艺，不仅能满足干细胞产品临床应用和商业化过程中对于细胞产量的需求，同时能够避免开放式操作所带来的污染风险，显著降低细胞生产制备过程中的耗材、人力、时间成本。此外，一次性大量收获细胞更能保证细胞终产品的质量均一性，降低细胞制备过程中的批次间差异，保证细胞治疗产品的质量和安全性。

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