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【细胞三维培养秘籍】分解招式,提炼核心,包教包会

【细胞三维培养秘籍】分解招式,提炼核心,包教包会

  • 分类:公司新闻
  • 作者:产品技术中心
  • 来源:华龛生物
  • 发布时间:2022-06-01
  • 访问量:0

【概要描述】【前情提要】细胞培养一直是细胞生物学中基础且核心的部分,无论是进行细胞性状的研究还是进行细胞药物的开发,都需要以细胞体外扩增技术——即细胞培养技术为基础。而将原有的二维细胞培养向三维细胞培养转化,正是大势所趋。

【细胞三维培养秘籍】分解招式,提炼核心,包教包会

【概要描述】【前情提要】细胞培养一直是细胞生物学中基础且核心的部分,无论是进行细胞性状的研究还是进行细胞药物的开发,都需要以细胞体外扩增技术——即细胞培养技术为基础。而将原有的二维细胞培养向三维细胞培养转化,正是大势所趋。

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【前情提要】

细胞培养一直是细胞生物学中基础且核心的部分,无论是进行细胞性状的研究还是进行细胞药物的开发,都需要以细胞体外扩增技术——即细胞培养技术为基础。而将原有的二维细胞培养向三维细胞培养转化,正是大势所趋

点击图片 阅读原文

对刚接触细胞三维培养的实验人员来说,如何快速得到一套最优三维培养工艺尤为重要。本文将针对3D FloTrix®细胞三维培养工艺验证阶段涉及到的工艺及关键点进行阐述。

 

准备阶段

1.转瓶(spinner flask):

① 转瓶内表面为非贴附处理表面,使用前需调整好桨叶位置,并对转瓶进行清洗、高温高压灭菌、烘箱烘干后再使用。

图为:3D FloTrix® miniSPIN 转瓶

② 考虑用户的不同使用习惯和需求,华龛生物还有一次性生物反应器转瓶产品以供选择。一次性转瓶即开即用,无需清洗、高温高压灭菌等操作。

图为:一次性转瓶

从左至右依次为125mL、250mL、500mL

 

  Tips

   ① 桨叶具瓶底0.5cm为最佳距离:

桨叶位置过高导致瓶内液体不均匀,桨叶位置过低会发生桨叶与瓶底摩擦,不利于细胞生长。

  

图为:桨叶距瓶底部最佳位置

   

  ②转瓶规格选择:以间充质干细胞为例

图为:不同规格转瓶使用的微载体用量及收获的细胞数

2.种子细胞:

 

三维培养过程中,种子细胞的质量对培养能否成功起着至关重要的作用。

因此三维接种需对种子细胞进行质检,包括细胞的倍增时间,细胞的活率,以及细胞表面标志物等是否合格。

图为:以间充质干细胞为例

质检项目与标准

 Tips

 ① 如培养细胞类型为干细胞,建议细胞代次在P2-P5之间

 ② 二维培养的细胞群体倍增时间PDT在19-20h范围之间

 ③ 二维消化细胞时间不宜过长,方可保持较高的细胞活性。

 

【二:培养阶段】 

1.细胞3D接种:

微载片(即开即用)加入无菌转瓶中,加入一定量的培养基,将微载片均匀分散在培养基中,加入细胞,补足培养基。将转瓶置于搅拌主机上,设置转速,进行培养。

 

 

Tips

 接种时采用间速培养,可增加细胞贴附率。

(细胞贴附率=接种后24小时细胞数 / 接种时细胞数×100%)

 

2.细胞培养:培养过程中监测细胞生长状态主要有三个方法。

① 计数:取样后,加入裂解液裂解微载体,进行细胞计数,观察细胞增殖情况;

② 荧光染色:采用活死荧光染色液染色微组织(细胞结合在为载体上),荧光显微镜下可直观观察细胞在微载体上的生长状态,随着三维细胞培养的时间增长,微载体球上的细胞逐渐增多,如下图。

  

      培养时间24h放大倍数40x           培养时间48h放大倍数40x            培养时间96h放大倍数100x

 

③ 葡萄糖含量:细胞培养过程中会消耗培养基中的葡萄糖,葡萄糖的消耗会间接反应细胞增殖状态。

图为:细胞浓度与葡萄糖含量的关系举例 

 Tips

 

 裂解微载体的时间30min±10min为宜。

 

【三:收获阶段】 

细胞三维培养4-5天,将微载体用温和裂解液裂解后收获细胞。

1.多次实验数据统计,采用3D TableTrix® 结合3D FloTrix® 动态培养工艺,脐带来源的间充质干细胞(UCMSC)的扩增倍率可达10-16倍

图为:人源脐带MSC细胞扩增曲线图 

2.将UCMSC细胞进行3D连续传代培养,从P4代细胞连续传代6代,细胞96小时仍可保持12-14倍的扩增倍率

图为:人源脐带MSC连续传代图

 

【四:质检阶段】 

培养后的细胞,想要进行后期应用,一定要经过严格的细胞质量检验。

 

1.以间充质干细胞为例:对经过三维培养后的细胞进行质检,四大细胞质检项目均合格

图为:MSC质量检测四大项目类别

 

【华龛3D培养工艺】 

随着华龛3D FloTrix® 培养工艺被更多人知晓,越来越多的科研工作者都开始尝试通过3D FloTrix® 工艺进行细胞培养。

目前采用3D FloTrix® 培养工艺培养的细胞类型已有很多种。也期待3D FloTrix® 培养工艺应用于更多种类的细胞培养.....

图为:3D FloTrix® 培养工艺已培养的细胞类型

 

【华龛技术服务部】 

秘籍虽好,但精力有限?不必担心~

华龛技术服务部提供专业化、精细化、定制化的3D细胞培养服务,为您省去诸多烦恼,把有限的精力投入到无限的研究开发中去......

您在3D细胞培养的过程中有任何问题,或者想要快速优化出一套合适的三维培养工艺,都可以联系我们。

 

【服务项目】 

3D细胞培养方向:

提供定制化3D实验方案

定制化3D细胞培养

3D细胞培养工艺优化

3D细胞衍生物收集方向:

3D细胞上清生产服务:

  大批量生产干细胞、工程化细胞培养上清;

外泌体纯化服务

  细胞上清中的外泌体纯化;

质量检测服务

  细胞上清中无菌、内毒素、支原体、蛋白浓度、细胞分泌因子等检测;

  外泌体的粒子浓度、粒径大小、透射电镜及免疫印迹等鉴定。 

 



 

留下您的问题和需求技术人员将会与您详尽沟通

 

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